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    生物緩沖劑的分類和應用——威德利試劑公司幫您解讀

    發布時間:2021-07-04   點擊次數:89次

    一生物緩沖劑的分類:

    1.    磷酸鹽緩沖液

      磷酸鹽緩沖液是應用廣泛的生物緩沖液。由于其二次離解作用,緩沖液pH值范圍較寬,可配置不同pH值的酸性、堿性和中性緩沖液:

           制備酸性緩沖液可直接使用NaH2PO4或KH2PO4, pH值范圍為1~5;

     

      堿性緩沖液可直接使用Na2HPO4或K2HPO4, pH范圍為9~12;

     

      中性緩沖液中含有等量的NaH2PO4和Na2HPO4或等量的KH2PO4和K2HPO4溶液,pH值為5.5~8.5。

         優點:①易于配制成各種濃度 ;②pH值范圍寬;③pH受溫度的影響??;

       缺點:①易與常見的鈣、鎂、重金屬離子形成沉淀;②抑制某些生化過程;

     

    2. Tris緩沖液

     

      Tris緩沖液在生物化學研究中有著廣泛的應用。它是弱堿,通常在“中性”范圍內使用。Tris-HCl緩沖:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0。

     

      除TRIS - hcl外,TRIS還有多種衍生化緩沖:

     

      TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;

     

      TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一種常用于Western Blotting的膜緩沖液;

     

      TE=Tris-HCl+EDTA,對DNA堿基具有保護作用,常用于DNA的穩定和儲存;

     

      TAE=Tris堿+乙酸+EDTA,是一種廣泛應用于短片段DNA電泳的緩沖體系;

     

      TBE=三堿基+硼酸+EDTA,適用于長期DNA電泳,對小片段有較好的分離效果。

     

      優點: ①因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;②對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀。

      缺點:①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;②溫度效應大,溫度變化對緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。④此緩沖液對某些pH電極發生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

     

    3. Good’s緩沖液

     

      在 1960 年代中期,N.E.Good鑒于一般的緩沖液系統并不適合生化實驗所使用,必須用人為設計和人工合成的方法來找到專門用于生命科學研究的特定的緩沖體系,這些緩沖體系們都具有以下特質:

     

      1.pKa 在6~8 之間;2.在水溶液中有高溶解度;3.鹽效應很??;4.不易被運送通過細胞膜;5.不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度;6.不會與金屬離子形成錯合物,或錯合物不沉淀、不干擾生物活性;7.化學性質穩定。

     

      Good’s緩沖液的主要優點是不參加和不干擾生物化學反應過程,對酶化學反應等無抑制作用,所以它們專門用于細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質和酶的研究工作。

     

      其缺點是:①價格昂貴,②對測定蛋白質含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,因為它們會使空白管的顏色加深。

    二幾種生物緩沖劑的應用:

     

     

    1、Tris乙磺酸(TES)

    應用描述∶ pKa7.4(生理pH),是一種應用非常廣泛的生物緩沖試劑。TES適用于各種需要二價金屬離子的細胞培養體系,然而許多其他緩沖液(比如檸檬酸鹽或者磷酸鹽)會產生螯合或者沉淀反應,使其不能滿足這種要求。

    Bis-Tris,中文名雙(2-羥已基)氨基(三羥甲基)甲烷,CAS NO.6976-37-0,—種惰性的兩性離子緩沖液,隨著溫度的變化其解離常數只發生細微的變化。適用于血紅蛋白的分離,凍干保存中可保護血紅蛋白的穩定性??捎米骷∶富钚苑治龅挠行Ь彌_液。2-D凝膠電泳等電點聚焦電泳(IEF )中用作陰極液。

    2、Tricine

    應用描述∶ 應用ZUI廣泛的緩沖劑之一,常用做電泳緩沖液,以及用來重懸細胞沉淀。Tricine具有低負電荷和高離子強度的特性,非常適用于電泳分離1~100 kDa的低分子量蛋白。用來分離低分子量多肽的緩沖液組分之一,一種有效的羥自由基清除劑。

    3、PIPES、POPSO

    PIPES,pKa接近生理pH,適用于細胞培養作業。植物和動物組織研究中使用戊二醛法組織學用緩沖液,可降低脂質損失。POPSO:用于儲存DNA樣品,在amoniallyl標記過程可避免與首胺基團的交叉反應。

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